El Microscopio confocal, es un microscopio óptico que incorpora dos diafragmas:
La
utilidad de este diafragma de detección, es eliminar la luz proveniente
de planos superiores e inferiores al plano focal, aumentando con ello la claridad
y resolución de la imagen. Esta capacidad de optener SECCIONES ÓPTICAS,
es la característica principal y exclusiva del microscopio confocal.
La optención de secciones ópticas más o menos gruesas, viene determinada por una combinación entre el diámetro del diafragma de detección, la apertura numérica del objetivo y de la longitd de onda de la luz utilizada.
El haz de láser
es dirigido a un punto concreto del plano focal. La luz reflejada por la muestra
o la fluorescencia emitida, es dirigida y captada por un fotodetector, una vez
atraviesa el diafragma. La imagen focal se optiene tras rastrear la muestra
(scanning) con el láser. Las imágenes optenidas son siempre imágenes digitales:
Los fotodetectores (PMTs) transforman la señal lumínica en una señal eléctrica
que mediante el sistema informático acoplado, se traduce en un píxel. Cada píxel/voxel,
proporciona información referente a la localización tridimensional del punto
excitado, así como la intensidad lumínica de dicho punto.
Las principales aplicaciones de la microscopía confocal son entre otras:
MODELO CONFOCAL ESPECTRAL: LEICA TCS SP2
El Microscopio
Confocal Leica TCS SP2 (disponible en el Servicio) es un sistema mixto que combina
la información proporcionada por un espectrofotómetro y por un microscopio confocal.
Para ello, la luz emitida por la muestra, una vez ha pasado el diafragma, atraviesa
un prisma que desgloba la luz emitida en todo un espectro. Delante de cada fotodetector
se incorpora una rendija que selecciona el rango del espectro que queremos que
sea captado por cada detector. Las ventajas principales que ofrece este modelo
espectral frente a un microscopio confocal convencional, son:
- mayor eficiencia como consecuencia de la ausencia de filtros ópticos
de detección, (que nunca son 100% eficientes)
- posibilidad
de "crear filtros a voluntad del usuario" permitiendo seleccionar el rango del
espectro de detección, ajustando en cada momento a las condiciones concretas
de cada experimento, a diferencia de lo que ocurre con los microscopios confocales
convencionales, donde el espectro captado por cada detector queda restringido
a la disponibilidad de filtros concretos.
Modelo
Leica TCS SP2