Responsable: Anna Pérez Lezaun
Ubicación: Laboratorio117;
edificio Doctor Aiguader
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La secuenciación del ADN
El campo de la biología molecular ha dado un salto espectacular
en las últimas décadas grácias a dos grandes descubrimientos: el
desarrollo de un proceso para descifrar la secuencia de nucleótidos
del ADN (Sanger, premio Nobel 1980), y la invención de la técnica
de la reacción en cadena de la polimerasa ó PCR (Mullis, premio
Nobel 1993). Ambós descubrimientos han marcado la pauta de de desarrollo
de la técnicas más modernas de la biología molecular actual que
benefician a campos de estudio muy diversos.Una de las aplicaciones
más relevantes es la secuenciación de fragmentos de ADN.
Las tecnologías de secuenciación más relevantes se basan en el método de Sanger y una polimerasa termoestable que utiliza terminadores (ó cebadores) fluorescentes que permiten una secuenciación de tipo cíclico mediante un simple proceso de PCR. El producto de secuenciación es separado mediante una electroforesis en capilares, ó bien el geles de acrilamida desnaturalizantes, en equipos altamente sofisticados que permiten la secuenciación automatizada del ADN a gran velocidad y con elevada fiabilidad.
Aunque los secuenciiadores en gel todavía son utilizados por numerosos laboratorios, los equipos de secuenciación más modernos utilizan sistemas de electroforesis capilar, ya que presenta muchas ventajas comparado con la electroforesis tradicional en gel. Los capilares garantizan una disipación mucho más eficiente del calor, lo que permite la aplicación de voltages de electroforesis mucho más elevados, y por tanto, tiempos de carrera más cortos. Además mediante el uso de esta tecnología las muestras pre-secuenciadas son inyectadas electrocinéticamente en los capilares en menos de 30 segundos, y dado que el sistema de detección también es más sensible, se requiere menos muestra que con los antiguos geles.
Las aplicaciones más relevantes de estas tecnologías son la Secuenciación de Fragmentos de ADN provenientes de PCR o clonage (Secuenciación original o comparativa) y el Análisis de Fragmentos de PCR marcados con fluorocromos: "Genescanä" (detección de variación de STRs, VNTRs...); "Snapshotä" (detección de SNPs...).